微RNA-21-5p靶向调控程序性死亡蛋白4对系统性红斑狼疮患者外周血B细胞增殖与凋亡的影响

更新时间:2023-05-28

【摘要】目的探讨微RNA(RNA-21-5p)通过靶向程序性死亡蛋白4(PDCD4)对SLE患者外周血B细胞增殖与凋亡的调控作用。方法选择我院经临床确诊的SLE患者30例,采用梯度离心法提取外周血淋巴细胞(PBL),磁珠法分选B细胞后流式细胞术检测外周血B细胞比例;采用电转染法将细胞分为空白对照组、miRNA-21-5p阴性对照组、miRNA-21-5p Inhibitor组、PDCD4阴性对照组、PDCD4 siRNA组。于转染后48 h收集细胞。采用实时荧光定量(RT)-PCR法检测各组细胞miRNA-21-5p及PDCD4 mRNA的表达水平;采用蛋白质印迹法检测各组细胞PDCD4的蛋白表达;采用双荧光素酶靶标实验验证miR-21-5p和PDCD4的靶向关系;采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况、采用CCK-8法检测各组细胞的增殖情况;采用蛋白质印迹法和RT-PCR法分别检测各组细胞Fas、FasL、CD40和CD40L的表达水平。采用独立样本t检验对2组间数据进行比较;采用单因素方差分析对多样本实验结果进行统计分析;抗dsDNA抗体阳性率比较采用χ2检验。结果 SLE患者血清补体[C3(0.85±0.11)g/L、C4(0.54±0.09)g/L]较健康对照组[C3(1.16±0.17)g/L、C4(1.57±0.09)g/L]降低(t=7.524,P<0.05;t=38.471,P<0.05),而抗dsDNA抗体(47%)、IgG(15.46±0.75)g/L、IgA(2.68±0.20)g/L较健康对照组抗dsDNA抗体(17%)、IgG(11.95±0.80)g/L、IgA(2.16±0.11)g/L均升高(χ2=4.427,P<0.05;t=15.218,P<0.05;t=10.125,P<0.05);SLE患者外周血B细胞比例[(6.78±0.29)%]、miRNA-21-5p表达水平(7.52±0.59)%较健康对照外周血B细胞比例[(2.03±0.24)%]、miRNA-21-5p表达水平(3.60±0.62)均升高(t=59.064,P<0.05;t=19.317,P<0.05),而SLE患者外周血PDCD4基因表达水平(1.54±0.35)较健康对照(4.42±0.42)降低(t=19.126,P<0.05);与空白对照组和miRNA-21-5p NC组相比,miRNA-21-5p Inhibitor组细胞增殖受到抑制,细胞凋亡比例升高(F=5.244,P<0.05;F=37.903,P<0.05);与空白对照组和PDCD4 NC组相比,PDCD4 siRNA组细胞增殖能力增强,细胞凋亡比例减少(F=5.956,P<0.05;F=25.431,P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验分析结果显示,PDCD4是miRNA-21-5p的靶基因。结论 miRNA-21-5p可能通过抑制PDCD4的表达促进SLE患者外周血B细胞增殖,导致B细胞凋亡异常。miRNA-21-5p可作为SLE治疗新的靶向基因。

【关键词】 红斑狼疮 系统性 B淋巴细胞 微RNA-21-5p 程序性死亡蛋白4 增殖 细胞凋亡

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